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IFA-PGA—固定化青霉素?;?
面議

IFA-PGA是寧夏乙征生物工程有限公司與華東理工大學(xué)共同開發(fā)的一款新型固定化酶,其可以高效地催化青霉素G或頭孢G酸水解生產(chǎn)6-APA或7-ADCA,也可以用于催化合成其他半合成青霉素和頭孢菌素。此外,IFA-PGA也能用于催化制備手性氨基酸、氨基醇、肽等眾多手性醫(yī)藥化工產(chǎn)品。

IFA-PGA基因來源于糞產(chǎn)堿桿菌(Alcaligenes faecalis),在大腸桿菌中高效異源表達,經(jīng)發(fā)酵生產(chǎn)、分離純化后,以共價結(jié)合的方法固定化在多孔顆粒狀高分子樹脂上,該固定化酶蛋白結(jié)合牢靠,穩(wěn)定性極高。

IFA-PGA的特性

糞產(chǎn)堿桿菌來源的青霉素G?;福≒GA)分子由兩個亞基組成的,與來自于大腸桿菌的PGA相比較,僅有53%的DNA序列同源和49%的蛋白序列同源,其兩個亞基之間可以形成二硫鍵。IFA-PGA的酶學(xué)性質(zhì)有獨特的優(yōu)點:(1)IFA-PGA 對底物具有更高親和力,對青霉素G的Km值比大腸桿菌PGA低,比巨大芽孢桿菌PGA低三個數(shù)量級,其Kcat值是所有PGA中最高的;(2)IFA-PGA是PGA家族中唯一具有鏈內(nèi)二硫鍵的成員,酶的熱穩(wěn)定性和pH穩(wěn)定性均很高;(3)在手性分子識別上,IFA-PGA比大腸桿菌PGA、巨大芽孢桿菌PGA具有更高的選擇性;(4)IFA-PGA在有機溶劑中表現(xiàn)出很高的穩(wěn)定性。

     IFA-PGA的最適溫度在60-65℃,最適pH在8.0,水解青霉素的最適底物濃度在8-10%,水解頭孢G酸的最適底物濃度在10-12%。

IFA-PGA產(chǎn)品性質(zhì)

產(chǎn)品品牌

IFA-PGA

外觀

灰白色的顆粒(不同批次之間顏色略有不同,但不影響酶活)

載體

具有環(huán)氧基團的微孔球狀樹脂

顆粒大小

100-300μm

固定化方法

共價結(jié)合法

水份

大約為濕重的45-55%

活性(測定條件:2%Pen.GK, 28°C, pH8.0, 0.02M的磷酸緩沖液)

具體數(shù)據(jù)待定U/g (濕重)

IFA-PGA對青霉酸G鉀鹽、頭孢G酸、6-APA、7-ADCA、苯乙酸的表面吸附

未檢測到

穩(wěn)定性

在4°C密閉儲存保質(zhì)期12個月以上

IFA-PGA的活力測定

在100 ml玻璃夾套反應(yīng)器中,加入 50 ml 2 %Pen.GK溶液 (用0.02M的磷酸緩沖液配置),將pH計探頭插入液面以下以檢測反應(yīng)液pH,采用機械攪拌,攪拌轉(zhuǎn)速為200轉(zhuǎn)/分,反應(yīng)過程中用循環(huán)水浴控制反應(yīng)溫度在30℃,預(yù)熱5 min后加入固定化酶mg,反應(yīng)開始后pH下降,用堿式滴定管滴加0.1 M的NaOH標準溶液保持反應(yīng)體系pH 穩(wěn)定在8.0,反應(yīng)開始后3 min開始計時,用秒表準確計時5 min后停止滴加NaOH標準溶液,記錄5min內(nèi)消耗的堿液體積以計算每克固定化IFA-PGA的酶活,計算公式如下:

公式中A為固定化酶酶活(U/g),VNaOH為NaOH標準溶液消耗的體積(ml),m為固定化酶的質(zhì)量(g)。

包裝與儲存

本品采用聚乙烯塑料桶包裝,規(guī)格有30公斤/桶、50公斤/桶,也可以根據(jù)客戶的需要定制包裝規(guī)格。

要求儲藏在4 ℃密閉空間內(nèi),避免陽光直射和水分散失。


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